REPORT Ozono terapia Vs COVID-19: tutto ciò che nessuno vi dirà mai

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Durante questa “era di coronavirus”, le notizie false stanno creando uno stato confusionale storico.
Il nostro obiettivo è chiarire l’efficacia della terapia con ozono rispetto a Covid-19 , riportando tutte le prove scientifiche autentiche e qualsiasi problema relativo all’uso dell’ozono.

L’ozono è un gas a doppia sfaccettatura. Ha una rilevanza protettiva cruciale nel bloccare parzialmente le radiazioni UV mutagene e cancerogene emesse dal sole (lunghezze d’onda di 100-280 nm) nella stratosfera [a], mentre la sua crescente concentrazione nella troposfera provoca gravi danni polmonari e aumento della mortalità [b, c].

Nonostante questo inconveniente, ci sono crescenti evidenze sperimentali e cliniche sull’uso medico dell’ozono [de]. Dal XVI secolo, Paracelso aveva ingegnosamente immaginato che “tutto è veleno e nulla è senza veleno e solo la giusta dose differenzia un veleno da un rimedio”.

Nel 2005, Timbrell ha ribadito il concetto nel suo libro: “Il paradosso del veleno; prodotti chimici come amici e nemici “[f]. Durante l’evoluzione della Terra, sfruttare l’ossigeno da parte dei metazoi ha permesso una fantastica biodiversità e crescita, ma ha anche creato un “veleno” ad azione lenta.

È ragionevole credere che il sistema antiossidante si sia lentamente evoluto e specializzato negli ultimi due miliardi di anni per contrastare la formazione giornaliera (3-5 g nell’uomo) di superossido di anione nei mitocondri e il rilascio di H2O2 da parte delle onnipresenti ossidasi NADPH.

Tuttavia, vi è un consenso generale sul fatto che la produzione fisiologica di H2O2 sia essenziale per la vita. Olivieri et al. [g] e Wolff [h] sono stati i primi a descrivere l’effetto di basse concentrazioni di timidina radioattiva o di una dose molto bassa di radiazioni che induce una risposta adattativa nelle cellule umane rispetto a una dose elevata.

Goldman [i] ha introdotto il termine “ormesi” per indicare “l’effetto benefico di un’esposizione a basso livello a un agente dannoso ad alti livelli”. È merito di Calabrese aver controllato sperimentalmente questo concetto e aver presentato una serie di esempi di risposte stimolatorie a seguito di stimoli al di sotto della soglia tossicologica.

Fino al 2002 la terapia con ozono era farmacologicamente concepita come una terapia in cui le basse dosi di ozono erano stimolanti, mentre le alte dosi erano inibitorie. Questa concezione, che riflette l’idea classica che una bassa dose di antigene sia stimolante, in cui un sovradosaggio di antigene è inibitorio, era vaga e inadatta perché l’ozono agisce in modo complesso e una dose elevata può ancora essere efficace ma accompagnata da effetti collaterali.

In effetti, nel 2002 uno di noi ha ampiamente delineato la sequenza di reazioni biochimiche suscitate ex vivo dopo l’aggiunta di un certo volume di miscela di gas O2-O3 a un uguale volume di sangue umano [m].

Innanzitutto, mescolare il sangue con un ossidante implica uno stress ossidativo calcolato e preciso, cioè un cambiamento omeostatico con la produzione di messaggeri altamente reattivi. Lo stress ossidativo, come molti altri, induce una risposta biologica che porta a un fenomeno adattativo.

Il significato teleologico di questa risposta è universale, dai batteri alle piante e ai mammiferi, e piccoli stress ripetitivi inducono una risposta di adattamento estremamente utile rappresentata dal rilancio di meccanismi di difesa critici [m,n].

Allo stesso tempo, Calabrese e Baldwin hanno descritto l ‘”oresi di stimolazione da sovracompensazione” (OCSH) come il risultato di un processo biologico compensativo a seguito di un’interruzione iniziale nell’omeostasi [l].

Dopo le informazioni di un revisore anche Relater ha espresso questa possibilità [o]. L’ozono presenta alcune sottili differenze che verranno spiegate chiarendo le reazioni biochimiche che si verificano tra i composti organici del plasma e questo gas.

L’ozono (O3) è la forma allotropica triatomica dell’ossigeno, la sua potenza ossidante è la terza dopo fluoro e persolfato ed è superiore a O2 [15].

L’ozono terapia (OT), in ambito medico, impiega una miscela di gas di O2 / O3 , ottenuta dalla modifica dell’ossigeno di livello medico utilizzando un dispositivo generatore di ozono che deve essere somministrato in situ a causa della breve emivita dell’ozono (a 20 ° C la concentrazione di O3 viene dimezzata entro 40 minuti, a 30 ° C entro 25 minuti) [15].

Le concentrazioni cliniche usuali di O3 vanno da 10 a 60 µg / mL (usando O 2 come veicolo) che, su base percentuale, può variare in una miscela di O3 (0,5-0,05%) e O2 (95-99,5%) [16 ].

Il principale meccanismo di O2 / O3 sulla fisiologia umana si adatta al concetto di precondizionamento ossidativo [17].

Questo concetto è stato ora dimostrato sia a livello proteomico che genomico [18], in studi in vitro e in studi clinici [19]. Uno stimolo ossidante calibrato da O2 / O3 può modulare il sistema antiossidante endogeno e aiutare nel controllo di diverse condizioni patologiche [20].

La modulazione di O2 / O3 sulla via Keap1 / Nrf2 / ARE e la riduzione di IL-6 e IL-1β sono coinvolte nel meccanismo d’azione dell’ozono [21]. Ciò implica che l’effetto citoprotettivo osservato durante il trattamento con O2 / O3 può influire sulle condizioni cliniche causate da SARS-CoV-2.

Questa recensione è focalizzata sull’effetto citoprotettivo di O2 / O3 in diversi tessuti, principalmente attraverso la modulazione delle vie NF-κB / Nrf2 e delle citochine IL-6 e IL-1 β.

Esistono prove precliniche e cliniche a supporto del potenziale ruolo dell’OT nella prevenzione e nella gestione della citotossicità indotta da diversi farmaci e malattie, comprese le malattie virali [21-24].

Il meccanismo principale è legato alla modulazione dello stress ossidativo e delle citochine pro-infiammatorie. I termini di acquisizione delle prove inclusi nella ricerca di informazioni erano:

COVID-19, SARS-CoV-2, SARS, ozono, OT, polmonite virale. Database bibliografici consultati: MEDLINE / PubMed, SciELO, LILACS, PAHO, EMBASE, ZOTERO ISCO3, WHO International Clinical Trials Registry Platform e NIH. Biblioteca nazionale di medicina degli Stati Uniti.

Il tipo di documenti esaminati è stato pubblicato tra il 1980 e il 2020, in russo o inglese e comprendeva: articoli originali, tesi pubblicate, relazioni cliniche, studi clinici in corso e revisioni bibliografiche. I criteri di esclusione erano la mancanza di libero accesso al testo completo a causa di vincoli finanziari e / o studi che presentavano prove scientifiche inadeguate.

Potenziali azioni terapeutiche dell’ozono nelle malattie virali

L’ozono può inattivare i virus attraverso l’ossidazione diretta dei suoi componenti [25]. Tuttavia, l’attività viricida in vivo diventa incerta quando i virus sono nei fluidi biologici o, peggio ancora, quando sono intracellulari (pneumociti, epatociti, epiteli, linfociti CD4 +, monociti, cellule gliali e neuronali) perché il potente sistema antiossidante delle cellule protegge l’integrità virale [15].

Questo è il motivo per cui è irrazionale utilizzare l’iniezione diretta di gas o altri metodi di applicazione dell’ozono non raccomandati [16,26].

L’OT rappresenta un’utile terapia aggiuntiva e complementare, ma né l’ozono, né H2O2 (uno dei principali mediatori O3) possono raggiungere concentrazioni sufficienti nei tessuti perché la capacità antiossidante del plasma protegge i patogeni liberi e i virus intracellulari sono inaccessibili [27].

Al fine di esplorare l’efficacia dell’OT nelle malattie virali, Bocci e Paulesu [28] hanno spiegato la possibilità di come l’ozono può agire in vivo. I seguenti meccanismi possono avere una certa rilevanza:

  1. Un trattamento terapeutico a ozono prolungato sembra in grado di indurre un adattamento allo stress ossidativo, quindi un riequilibrio dello stato redox cellulare, che è un processo fondamentale per inibire la replicazione virale. Il meccanismo paradossale con cui l’ozono (un potente ossidante) può indurre una risposta antiossidante, è attualmente dimostrato non solo a livello proteomico, ma anche a livello genomico. L’ozono applicato a una dose terapeutica modula il fattore nucleare Nrf2 e NF-κB e induce l’omeostasi dell’ambiente antiossidante [18,29–32]. Lo stress ossidativo e l’immunità innata svolgono un ruolo chiave nei percorsi di lesione polmonare che controllano la gravità della citotossicità polmonare acuta durante le infezioni virali come la SARS [33].
  2. L’induzione di citochine antivirali come IFN e la modulazione di citochine pro-infiammatorie come IL-6, sono state dimostrate da sangue ozonizzante come l’autoemoterapia maggiore (MAH). Sebbene l’ozono sia un induttore debole, i linfociti e i monociti reinfusi durante l’autoemoterapia principale (MAH), possono migrare attraverso il sistema linfoide e attivare altre cellule che, nel tempo, porteranno alla stimolazione del sistema immunitario [32,34]. Ciò può rappresentare un processo importante perché è noto che una malattia virale acuta diventa più grave perché il virus è particolarmente virulento, la popolazione virale eterogenea si evolve rapidamente e sfugge al controllo immunitario, o perché il sistema immunitario diventa tollerante agli antigeni virali e diventa incapace di contrastare l’infezione. Inoltre, oltre all’induzione di HO-1 [18], un enzima protettivo, c’è anche il rilascio di alcune proteine ​​da shock termico (HSP) come HSP60, HSP70 e HSP90 che influenzano anche l’attività viricida. Queste proteine ​​sono potenti attivatori del sistema immunitario innato e sono in grado di indurre il sistema monocita-macrofagi e l’attivazione di cellule antigene-presentazione [15,35]. L’evidenza mostra che, durante l’epidemia di COVID-19, il grave deterioramento di alcuni pazienti è stato strettamente correlato a un processo infiammatorio disregolato denominato “tempesta di citochine” [36,37].
  3. L’ossigeno-ozono terapia migliora l’ossigenazione [38,39], specialmente nei tessuti scarsamente ossigenati [40]. I pazienti con SARS sono soggetti ad epatite lieve non specifica [41], fibrosi polmonare [42] e insufficienza renale [43]. L’OT stabilizza il metabolismo epatico e tende a normalizzare i livelli plasmatici di fibrinogeno e protrombina nei pazienti infetti, suggerendo un miglioramento della sintesi proteica epatica [15]. Esistono numerose ricerche che dimostrano l’effetto citoprotettivo dell’ozono per prevenire danni ossidativi al cuore [44,45], al fegato [46,47], ai polmoni [48] e ai tessuti renali [49]. Gli autori hanno descritto in una recente revisione l’effetto citoprotettivo dell’ozono per prevenire e persino trattare il danno indotto dalla chemioterapia nel cuore, nel fegato, nel rene e nei tessuti polmonari [22].
  4. Durante l’ozonizzazione del sangue ex vivo per l’autoemoterapia minore, usando concentrazioni di ozono vicino a 90 µg / mL per mL di sangue, può essere possibile indurre l’ossidazione dei componenti virali liberi, che potrebbero teoricamente rappresentare un vaccino inattivato e immunogenico [15,50, 51].
  5. Soluzione salina ozonizzata (O3SS). Questo metodo è stato formalizzato dal Ministero della Salute della Federazione Russa nei primi anni ’80 ed è stato ufficialmente implementato negli ospedali di sanità pubblica, in particolare per le specialità di ortopedia, dermatologia, ginecologia e ostetricia [16,52]. Nel 2004, è stato anche ufficialmente riconosciuto in Ucraina. Gli effetti benefici di questa terapia sono supportati da una grande quantità di articoli scientifici e una forte esperienza clinica. [53]. Il metodo consiste nel gorgogliare e saturare una soluzione fisiologica (0,9%) con una miscela di ozono-ossigeno a concentrazioni calcolate in base al peso del paziente (compreso tra 1 e 5 µg / kg di peso corporeo). La sua somministrazione dura circa 20-30 minuti. A differenza del titolare dell’autorizzazione all’immissione in commercio, l’O3SS è stato usato come terapia complementare nelle malattie virali come Epstein Barr, citomegalovirus, papillomavirus, HIV, Herpes zoster, Herpes simplex, ecc. Poiché la soluzione salina è un espansore del plasma, O3SS rappresenta una quantità maggiore di sangue in trattamento rispetto al MAH e quindi, in teoria, il numero di sessioni potrebbe essere ridotto. Korolev BA, Boyarinov GA e Sokolov VV [ 54,55] ha mostrato che quando veniva usato un O3SS durante il bypass cardiopolmonare, le cellule degli organi del paziente consumavano più glucosio rispetto ai livelli basali. Pertanto, si è concluso che gli effetti terapeutici delle soluzioni fisiologiche ozonizzate, sono determinati dalla miscela di O2 / O3 disciolta, dai radicali liberi, dal perossido di idrogeno e dalle strutture acquose esagonali formate durante il gorgoglio di soluzioni acquose di NaCl con una miscela di gas O2 / O3. L’O3SS rappresenta una quantità maggiore di sangue in trattamento rispetto al titolare dell’autorizzazione all’immissione in commercio e quindi, in teoria, il numero di sessioni potrebbe essere ridotto. Korolev BA, Boyarinov GA e Sokolov VV [54,55] hanno mostrato che quando un O3SS veniva usato durante il bypass cardiopolmonare, le cellule degli organi del paziente usa più glucosio rispetto ai livelli basali. Pertanto, si è concluso che gli effetti terapeutici delle soluzioni fisiologiche ozonizzate, sono determinati dalla miscela di O2 / O3 disciolta, dai radicali liberi, dal perossido di idrogeno e dalle strutture acquose esagonali formate durante il gorgogliamento delle soluzioni acquose di NaCl con una miscela di gas O2 / O3. L’O3SS rappresenta una quantità maggiore di sangue in trattamento rispetto al titolare dell’autorizzazione all’immissione in commercio e quindi, in teoria, il numero di sessioni potrebbe essere ridotto. Korolev BA, Boyarinov GA e Sokolov VV [54,55] hanno mostrato che quando un O3SS veniva usato durante il bypass cardiopolmonare, le cellule degli organi del paziente usa più glucosio rispetto ai livelli basali. Pertanto, si è concluso che gli effetti terapeutici delle soluzioni fisiologiche ozonizzate, sono determinati dalla miscela di O2 / O3 disciolta, dai radicali liberi, dal perossido di idrogeno e dalle strutture acquose esagonali formate durante il gorgoglio di soluzioni acquose di NaCl con una miscela di gas O2 / O3. le cellule degli organi del paziente usano più glucosio rispetto ai livelli basali. Pertanto, si è concluso che gli effetti terapeutici delle soluzioni fisiologiche ozonizzate, sono determinati dalla miscela di O2 / O3 disciolta, dai radicali liberi, dal perossido di idrogeno e dalle strutture acquose esagonali formate durante il gorgogliamento delle soluzioni acquose di NaCl con una miscela di gas O2 / O3. le cellule degli organi del paziente usano più glucosio rispetto ai livelli basali. Pertanto, si è concluso che gli effetti terapeutici delle soluzioni fisiologiche ozonizzate, sono determinati dalla miscela di O2 / O3 disciolta, dai radicali liberi, dal perossido di idrogeno e dalle strutture acquose esagonali formate durante il gorgoglio di soluzioni acquose di NaCl con una miscela di gas O2 / O3.

Terapia dell’ozono come modulatore Redox

Durante un’applicazione sistemica di O2 / O3 (principalmente MAH, O3SS, insufflazione vaginale e rettale), una parte dell’O3 viene rimossa dagli antiossidanti del mezzo. Un’ulteriore reazione di O3 con biomolecole genera aldeide (ad esempio 4-idrossinonenale (4-HNE)) e perossido (H2O2 e perossidi organici).

Questi sottoprodotti della reazione agiscono come messaggeri secondari e inducono ulteriori risposte ormonali adattive [56–58]. L’ozono a una dose terapeutica “agisce solo” come un modulatore o pro-farmaco e, inducendo messaggeri secondari, migliorerà le successive risposte adattative [21].

I mediatori come 4-HNE e H2O2 sono tra i messaggeri secondari più rilevanti che producono effetti benefici durante le applicazioni mediche, inducono uno stimolo ossidativo graduale, che produce la sintesi di antiossidanti endogeni come SOD, CAT e GPx [18,59].

Questo fatto implica che O2 / O3 è una terapia paradossale pro-ossidante che invoca una risposta antiossidante endogena. Inoltre, basse quantità di H2 O2 formate come conseguenza di O2 / O3 hanno un ruolo chiave nel meccanismo molecolare. L’H2O2 è cruciale e un attivatore comune della modulazione delle vie NF-κB e Nrf2 [60–62].

Inoltre, 4-HNE invia anche un segnale di stress ossidativo transitorio e i suoi effetti dipendono dalla concentrazione e dall’origine delle cellule / tessuti. Questo percorso può attivare la sintesi di diverse sostanze come: γ-glutamil transferasi, γ-glutamil transpeptidasi, HSP-70, HO-1 e enzimi antiossidanti come SOD, GPx, CAT e glucosio-6-fosfato deidrogenasi [21] .

Inoltre, questi effetti pluripotenti di 4-HNE possono essere spiegati dalle sue interazioni dipendenti dalla concentrazione con le reti di citochine e complessi sistemi antiossidanti cellulari che mostrano anche specificità cellulari e tissutali [59,63].

I risultati sperimentali hanno dimostrato che l’ozono a dosaggi terapeutici ex vivo o in vivo può attivare Nrf2 [20,32] che comportano una modulazione indiretta (inibizione) della via NF-κB.

Inoltre, Nrf2 sopprime l’attività di NF-κB eliminando ROS, che può causare l’attivazione di NF-κB attraverso l’induzione di proteine ​​antiossidanti, come HO-1 e NQO1. Inoltre, Nrf2 sopprime l’attività di NF-κB attraverso alcune interazioni proteina-proteina e sopprime anche un’espressione genica infiammatoria delle citochine attraverso il legame diretto con il loro promotore genico [64]. 

La via NF-κB attiva il rilascio di citochine pro-infiammatorie come: TNFα, IFNγ, IL1β, IL6, IL8, nonché i geni pro-infiammatori likecyclooxygenase-2 (COX-2) e l’ossido nitrico sintasi inducibile (iNOS) [65] .

È noto che la regolazione di entrambi i percorsi, NF-κB e Nrf2, prevedeva una diafonia per portare una risposta infiammatoria coordinata [66,67]. La modulazione della risposta infiammatoria dell’ozono era evidente in uno studio clinico l su pazienti con sclerosi multipla (ME) trattati con O2 / O3 per insufflazione rettale per 30 giorni [19].

Prendendo i dati originali di questa scia e ricalcolando i valori in termini di rapporto fosforilazione Nrf2 (come espressione dell’attivazione della via Nrf2) e IL-1β (come marcato della via NF-κB) questa modulazione è diventata evidente (Figura 1).

Nei pazienti con ME senza trattamento, l’equilibrio Nrf2 / NF-κB favorisce il processo infiammatorio e O2 / O3 ripristina l’equilibrio di tali percorsi.

Un’analisi individuale della variabile analizzata in questo studio ha mostrato un aumento significativo ( p <0,05) dei valori di Nrf2 nei pazienti trattati con ozono rispetto al gruppo di controllo (rispettivamente 0,93 vs 0,75 unità di densitometria), che ripristinano i significativi valori down-regolati di Nrf2 a livello basale nei pazienti con ME (0,56 unità densitometrica).

L’incremento di Nrf2 era in linea con la significativa riduzione del 61% del livello della citochina pro-infiammatoria IL-1β in pazienti trattati con ME rispetto ai livelli basali, anche i livelli di IL-1β in ME rimangono superiori del 94% rispetto ai valori normali soggetti.




Figura 1. Valutare Nrf2 / IL-1β come biomarcatori dell’attivazione della via dell’equilibrio Nrf2 / NF-κB dopo e prima del trattamento con O2 / O3. Gruppo di controllo, volontari sani; EM, pazienti con sclerosi multipla recidivante-remittente con episodi di non esacerbazione della malattia; EM + O3, pazienti con sclerosi multipla dopo trattamento con O2 / O3 per insufflazione rettale per 30 giorni (tre volte alla settimana durante un mese a 20 µg / mL). I dati sono stati presi e ricavati da Delgado et al. 2017 [19]. I valori rappresentano la media ± SEM di tre esperimenti indipendenti (* p <0,05).

Uno squilibrio tra Nrf2 / NF-κB è stato proposto in altre malattie come la neuropatia diabetica

[68] in cui l’ozono ha dimostrato sperimentalmente la sua efficacia bilanciando questa interruzione [62]. Tendenze simili sono state riscontrate nelle malattie virali, i percorsi NF-κB possono supportare l’infezione da virus dell’influenza A e promuovere la polmonite.

Attraverso l’attivazione del Nrf2 segnalando alcuni farmaci come emodin può aumentare il tasso di sopravvivenza, ridurre l’edema polmonare, il titolo virale polmonare e le citochine infiammatorie e migliorare i cambiamenti istopatologici polmonari [69].

Inoltre, è stato dimostrato che il virus della malattia emorragica del coniglio (che causa epatite fulminante letale nei conigli) ha un meccanismo patologico che comporta la repressione della via Nrf2 [70].

Terapia dell’ozono e citoprotezione

Gli antiossidanti sono importanti per il mantenimento dell’integrità cellulare e della citoprotezione. Modulando l’equilibrio Nrf2 / NF-κB, O2 / O3 non solo aumenta il sistema antiossidante endogeno, ma modula anche l’espressione delle citochine pro-infiammatorie e ha un impatto sulla citoprotezione.

COVID-19 infetta le vie respiratorie superiore e inferiore e causa una sindrome respiratoria da lieve a molto acuta con conseguente sovraespressione di citochine pro-infiammatorie, tra cui interleuchina IL-1β e IL-6.

L’attivazione dei recettori a pedaggio da parte di SARS Cov-2 RNA porta al rilascio di pro-IL-1β che viene scisso da caspase-1, seguito da attivazione infiammatoria e produzione di IL-1β maturo attivo che è un mediatore dell’infiammazione polmonare, febbre e fibrosi [71]. 

Tuttavia, la soppressione ma non l’esaurimento della famiglia pro-infiammatoria di IL-1 e IL-6 hanno dimostrato di avere un effetto terapeutico in molte malattie infiammatorie, tra cui infezioni virali, ad esempio topi privi di espressione di segnalazione IL-1, elevata replicazione virale di coronavirus [72].

Inoltre, i topi deficienti di IL-6 infettati dal virus dell’influenza hanno mostrato una mortalità più elevata, una maggiore perdita di peso corporeo e un maggiore accumulo di fibroblasti e un più basso turnover della matrice extracellulare (ECM) nei polmoni rispetto alle loro controparti di tipo selvaggio [73].

L’inflammasoma, un complesso proteico citosolico che media l’elaborazione e la secrezione di citochine pro-infiammatorie, è uno dei primi soccorritori durante l’infezione virale.

Le citochine secrete, in seguito all’attivazione dell’inflammasoma, regolano le cellule del sistema immunitario innato e adattativo, guidando le successive risposte immunitarie. 

Pertanto, non soppressivo, ma un modulatore di citochine può avere un impatto efficace sulla citotossicità vitale. Nella Tabella 1 sono riportati dati rappresentativi della downregulation delle citochine IL-1β, IL-6, IL-8 e TNF-α.

Tabella 1. Effetto dell’ozono terapia come modulatore delle citochine pro-infiammatorie.

L’espressione delle risposte di citochine a un segnale precedente è strettamente connessa all’azione di fattori nucleari. Un esperimento in vitro, condotto su cardiomiociti e fibroblasti cutanei, ha analizzato il ruolo dell’ozono a livello di Nrf2 e NF-κB indotto dalla doxorubicina [44]. Gli autori hanno analizzato il ruolo individuale di diverse dosi di ozono in questo modello.

Una nuova analisi di questi dati, calcolando il tasso NF-κB / Nrf2, ha mostrato l’evidente downregulation dell’effetto dell’ozono ma non la soppressione (Figura 2). La stessa tendenza è stata osservata anche nelle colture di fibroblasti cutanei trattate con doxorubicina e O2 / O3.


Figura 2. Valori dei valori di variazione della piega di NF-κB / Nrf2 come indice di attivazione della via NF-κB / Nrf2 con e senza trattamento O2 / O3. Controllo, coltura dei cardiomiociti; Dox, cellule più doxorubicina (100 nM); Dox + O3, cellula trattata con doxorubicina (100 nM) e ozono 40 μ g / mL. I dati sono stati presi e ricavati da Simonetti et al., 2019 [44]. I valori rappresentavano una media ± SEM di tre esperimenti indipendenti (* p <0,01).

Un’analisi dei singoli valori ha mostrato che il ripristino dell’equilibrio NF-κB / Nrf2 è stato raggiunto essenzialmente dalla conservazione del livello di Nrf2 nelle cellule trattate con ozono (rispettivamente 0,8 contro 0,9 volte di probabilità, nel gruppo di controllo), confrontato con i valori esauriti di Nrf2 osservati nelle cellule trattate con doxorubicina (0,5, piega della probabilità, rispetto al controllo della coltura cellulare).

Questo mantenimento dei livelli di Nrf2 evita l’incremento del 100% di NF-κB che si verifica durante il trattamento con doxorubicina. L’esperimento ha dimostrato che l’intervento con l’ozono preserva i fatti essenziali di Nrf2 per evitare e sovraregolare NF-κB.

La risposta ormonale, il precondizionamento ossidativo o l’adattamento allo stress ossidativo cronico, durante OT, è stato ora dimostrato sperimentalmente [78].

Il concetto di dosi è molto notevole in OT, anche la via di somministrazione e i protocolli clinici sono importanti.

A dosi più elevate l’effetto descritto dell’ozono potrebbe cambiare drasticamente. Alte dosi di ozono inducono la trascrizione genica della citochina pro-infiammatoria, del suo recettore e delle proteine ​​infiammatorie. Allo stesso tempo, invocano una regolazione negativa dell’interferone di tipo 1 e la risposta ai percorsi di infezione virale [79].

Le vie di somministrazione sistemica raccomandate sono: O3SS, MAH e ossigenazione del sangue extracorporea-ozonizzazione (EBOO).

I protocolli clinici devono essere conformi alle dosi e alle procedure standard definite nella Dichiarazione di Madrid dell’OT [16]. In Cina sono in corso almeno tre studi clinici che utilizzano l’autoemoterapia maggiore e sono necessari ulteriori studi clinici per confermare l’efficacia dell’OT come terapia complementare nel trattamento delle malattie COVID-19.

È una terapia complementare perché, mentre il paziente infetto è trattato con medicina allopatica, allo stesso tempo il paziente riceverà anche il trattamento complementare proposto.

Va notato che, anche se l’ozono non ha alcun effetto sull’infezione virale, la modulazione dimostrata dello stress ossidativo e delle citochine infiammatorie mediante l’ozonoterapia potrebbe offrire un effetto clinico rilevante e benefico. Inoltre, un piccolo impatto sui requisiti dei giorni di degenza, in particolare sulle unità di terapia intensiva, potrebbe portare a un elevato beneficio nell’attuale situazione critica che molti paesi stanno soffrendo.

Le proprietà biochimiche e farmacologiche dell’ozono

Aspetti generali dell’ozono Meccanismi d’azione ed effetti sul metabolismo cellulare
Gli effetti farmacologici osservati dell’ozono sono alla base delle sue proprietà chimiche e biochimiche.

Le proprietà farmacologiche dell’ozono dipendono dal fatto che l’ozono è una molecola di ossigeno triatomica, che reagisce con composti organici contenenti doppi legami e aggiunge i tre atomi di ossigeno al legame insaturo con la formazione di ozonidi.

Questa reazione è di grande importanza, poiché l’ozono provoca la scissione dei doppi legami con una reazione chiamata ozonolisi. In un mezzo acquoso (ad es. Sangue), gli ozonidi vengono immediatamente trasformati in idroperossidi stabili che hanno la capacità di rilasciare ossigeno quando il pH aumenta, come accade negli ambienti protonici.

Tale caratteristica chimico-fisica è tipica dei processi degenerativi e / o delle condizioni ischemiche. I lipoperidi derivati ​​dalla rottura di una catena di ozonidi perdono la caratteristica idrofobica dei lipidi e diventano solubili in acqua poiché sono composti lipidici a catena corta.

Resta generalmente inteso che gli effetti tossici dell’ozono sono mediati dalle reazioni dei radicali liberi, sebbene l’ozono non sia di per sé una specie radicale [206]. Due diversi meccanismi possono essere sostenuti per spiegare la formazione di radicali derivati ​​dall’ozono: un meccanismo diretto che coinvolge l’ossidazione delle biomolecole per fornire specie di radicali classici (idrossil radicale) e un meccanismo che coinvolge la produzione radicale-dipendente di specie citotossiche e non radicali (aldeidi) [ 207].

Tuttavia, al fine di chiarire completamente le basi biochimiche alla base degli effetti farmacologici dell’ozono, è importante illustrarne gli effetti su vari coenzimi responsabili della regolazione del metabolismo delle cellule di ozono.

A questo proposito, uno dei principali effetti dell’ozono è l’accelerazione della glicolisi; come è noto, infatti, una condizione fondamentale per garantire la continuità di questo processo è la costante reossidazione del NADH che si verifica a seguito dell’esposizione all’ozono.

Per quanto riguarda il metabolismo proteico, l’ozono interviene principalmente per la sua notevole affinità con i gruppi sulfidrilici in modo tale che si manifesti quando reagisce con il glutatione.

Allo stesso modo, l’ozono reagisce con aminoacidi essenziali come metionina, triptofano e altri aminoacidi contenenti zolfo (cioè cisteina). In questo caso, gli aminoacidi sono protetti dall’inattivazione dell’ozono da due reazioni che ne impediscono il degrado: prima l’ossidazione del glutatione e poi l’ossidazione dei coenzimi NADH e NADPH, reazioni chiave nel meccanismo biochimico dell’ozono.

Infine, l’ozono reagisce direttamente con acidi grassi insaturi, che hanno un doppio legame di carbonio e sono quindi disponibili per una reazione ossidativa, portando alla formazione di perossidi a seguito della scissione idrolitica delle catene lipidiche. Le catene lipidiche sono così frammentate con una perdita del loro carattere idrofobo e si trasformano in componenti idrofile.

Terapia dell’ozono e malattie polmonari

Precedenti studi hanno dimostrato che l’ozono presenta effetti controversi nelle malattie polmonari. In particolare, Leroy et al. [208] ha dimostrato che l’esposizione di soggetti umani all’ozono (200 ppb) determina un aumento significativo dell’espressione di vari geni coinvolti nel processo di guarigione della ferita (cioè osteopontin).

Gli autori hanno incluso nel loro studio diciannove soggetti, con e senza asma, esposti all’aria pulita (0 ppb), bassi livelli di ozono (100 ppb) e alti (200 ppb) per 4 ore in tre diverse occasioni in un clima: camera controllata.

Successivamente, i soggetti reclutati per lo studio sono stati trattati con broncoscopia con lavaggio broncoalveolare (BAL) 20 ore dopo la fine dell’esposizione. Al fine di spiegare ulteriormente gli effetti controversi dell’ozono nelle malattie polmonari, abbiamo ulteriormente analizzato i set di dati degli autori dalla banca dati NCBI GEO (disponibile online: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) con il numero di accesso GSE58682 (GPL6244), al fine di delineare un profilo di espressione genica in grado di determinare un’analisi dell’ontologia genica.

In particolare, abbiamo focalizzato la nostra attenzione sui dati di soggetti sani e confrontato 18 soggetti esposti all’aria pulita (0 ppb) rispetto a 19 soggetti a livelli ambientali elevati (200 ppb) di ozono.

Limitando il livello di soglia di significatività a p <0,01 e il log10 volte cambiano a 0,7 per i geni upregolati e -0,7 per i downregolati, abbiamo identificato 29 geni upregolati e 309 downregolati in soggetti esposti a 200 ppb di ozono, rispetto ai soggetti esposto ad aria pulita.

La nostra analisi di Gene Ontology (GO) è stata eseguita utilizzando l’utilità web GeneMANIA (disponibile online: http://genemania.org/) [209] e GHATER (strumento di annotazione genica per aiutare a spiegare le relazioni) (Disponibile online: http: // changlab.uth.tmc.edu/gather/) [10], permettendoci di assemblare tutti i dati di interazione disponibili nel set di dati creando reti di grandi dimensioni, che catturano le attuali conoscenze sulla modularità funzionale e l’interconnettività dei geni in una cellula.

Durante la nostra analisi, abbiamo identificato 29 geni upregulati e 309 downregulati espressi significativamente nel BAL di soggetti sani esposti a 200 ppb di ozono per 4 ore rispetto all’esposizione solo all’aria pulita.

L’analisi GO ha mostrato risultati sorprendenti. Infatti, in seguito all’esposizione all’ozono, il parenchima alveolare risponde con l’attivazione di geni coinvolti nell’immuno-attivazione. Processi come la chemiotassi (chemiotassi delle cellule, chemiotassi dei leucociti e chemiotassi dei granulociti), le risposte alle citochine (legame del recettore delle citochine) e l’infiammazione sono stati significativamente innescati (Figure 1A e 2A-C).

Figura 1. L’analisi dell’ontologia genica: (A) L’analisi del set di dati ha mostrato che i 29 geni sovraregolati erano coinvolti in diversi processi immunologici. Il processo più significativo è stato la chemiotassi cellulare (il log negativo di FDR (ngLogFDR) era di 58 e i geni coinvolti (GI) erano 18). (B) I 309 geni sottoregolati identificati durante l’analisi GSE58682 appartengono alla risposta all’interferone di tipo I (FDR = 14, GI = 16). È interessante notare che la capacità di risposta antivirale nei soggetti esposti all’ozono era significativamente compromessa.
Figura 2. La rappresentazione della rete GeneMania dei 29 geni upregulati e 309 downregulati:
(A) L’analisi GO di 29 geni coinvolti durante l’esposizione a un alto ppb di ozono esprime
(B) la chemiotassi cellulare e
(C) stimoli infiammatori come biologici processi.
(D) I 309 geni sottoregolati in soggetti esposti a un alto ppb di ozono appartengono ai processi biologici come risposta a
(E) virus e all’interferone (F) di tipo I

D’altro canto, la downregulation di diversi geni coinvolti nella risposta antivirale e nella regolazione degli interferoni di tipo I potrebbe, a lungo termine, predisporre a una suscettibilità alle infezioni opportunistiche (Figura 1B, Figura 2D – F e Figura 3) . I nostri risultati sono coerenti con i precedenti rapporti [211], dimostrando che l’esposizione all’ozono riduce la capacità dei topi di sopravvivere a un’infezione da K. pneumoniae riducendo la capacità fagocitica dei macrofagi alveolari.




Figura 3.   Alte dosi di ozono inducono la trascrizione genica della citochina pro-infiammatoria, del suo recettore e delle proteine ​​infiammatorie. Allo stesso tempo, assistiamo a una regolazione negativa dell’interferone di tipo 1 e alla risposta ai percorsi di infezione virale.

Terapia dell’ozono e CNS

Studi recenti hanno riferito che il sistema nervoso è influenzato dall’esposizione all’ozono. In particolare, nei gatti esposti a 1 ppm (parti per milione) di O3 [212] è stato riscontrato un aumento del tempo di sonno ad onde lente e una diminuzione del tempo totale del sonno paradossale [212].

Allo stesso modo, i cambiamenti nelle prestazioni mentali, nella fatica, nel mal di testa e nella letargia sono stati citati negli esseri umani esposti a questo gas [213]. A questo proposito, diversi rapporti suggeriscono che l’ozono porta ad un aumento dello stress ossidativo nel sistema nervoso centrale (CNS), che a sua volta porta a disfunzione cerebrale significativa misurata dalla compromissione cognitiva e motoria (Figura 4).

In particolare, Rivas-Arancibia et al. ha mostrato che i ratti esposti a varie concentrazioni di ozono (0, 0,1, 0,2, 0,5 o 1 ppm) hanno mostrato un deterioramento della loro memoria a lungo termine nel test di evitamento passivo e hanno ridotto l’attività motoria [214].

Inoltre, gli autori hanno suggerito che tale compromissione funzionale è stata anche accompagnata da un aumento dei livelli di SOD Cu / Zn, suggerendo così che l’esposizione all’ozono influisce sulla memoria a lungo termine probabilmente in associazione con stress ossidativo (Figura 4).

Coerentemente con questa ipotesi, Guerrero et al. [215] hanno dimostrato che la vitamina E (50 mg / Kg) previene la perossidazione lipidica mediata dall’esposizione all’ozono e mitiga la disfunzione cerebrale misurata dal miglioramento della memoria a breve e lungo termine in un compito di evitamento passivo.

Coerentemente, Avila-Costa ha dimostrato che l’inalazione di ozono ha portato anche a cambiamenti morfologici nel cervello con particolare riguardo alla regione dell’ippocampo CA1 [216]. In particolare, gli autori hanno dimostrato che l’esposizione all’ozono (1 ppm) ha comportato una riduzione significativa della densità della colonna vertebrale nei neuroni piramidali dell’ippocampo e che ciò può spiegare la precedente compromissione della memoria descritta.

Allo stesso modo, altre aree del sistema nervoso centrale sono particolarmente coinvolte nella tossicità mediata dall’ozono, comprese le aree respiratorie centrali (ad esempio, solitari nucleus tractus e midollo ventrolaterale).

L’esposizione all’ozono porta ad un aumento dello stress ossidativo in queste regioni e, a seguito di tale insulto ossidativo, le cellule astrogliali aumentano l’espressione del fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF) come potenziale meccanismo protettivo che persiste a seguito della cessazione dell’esposizione all’ozono (Figura 4).

Coerentemente, Gackière et al. [217] ha mostrato che l’esposizione di ratti a varie concentrazioni di ozono (da 0,5 a 2 ppm) per un intervallo di tempo compreso tra 1,5 e 120 h ha determinato una significativa attivazione neuronale dipendente dal tempo e dalla dose nelle regioni dorsolaterali del nucleo tractus solitarius .

È interessante notare che gli autori hanno anche mostrato l’attivazione neuronale in altre strutture centrali interconnesse, tra cui il midollo ventrolaterale caudale, il nucleo parabrachiale, il nucleo centrale dell’amigdala, il nucleo del letto dello stria terminalis e il nucleo ipotalamico paraventricolare.

L’esistenza di un possibile asse polmone-cervello nella citotossicità mediata dall’ozono è stata ulteriormente supportata da Mumaw CL et al. [18], dimostrando che l’ozono inalato ha aumentato l’attivazione microgliale tramite il recettore MAC1 indipendentemente dal rilascio di citochine proinfiammatorie circolanti e in modo dipendente dall’età.

Figura 4. Una rappresentazione schematica dei possibili meccanismi di azione dell’ozono sul sistema nervoso centrale.

D’altra parte, dovrebbe essere segnalato che esistono forti evidenze scientifiche e cliniche a supporto degli effetti benefici dell’ozono per il trattamento di alcuni disturbi neurologici.

Tuttavia, tali risultati non sono in contraddizione con studi citati in precedenza poiché nella maggior parte dei casi l’ozono è stato somministrato localmente e poiché gli animali e / o i pazienti non sono stati esposti all’ozono per inalazione.

La prima prova degli effetti benefici dell’ozono nei disturbi neurologici si riferisce al trattamento efficace di un caso di dolore intrattabile nella testa e nel viso associato a cambiamenti patologici del talamo ottico [219].

Da allora, l’ozono è stato usato per trattare l’allodinia del dolore neuropatico e l’iperalgesia è definita come una maggiore sensibilità agli stimoli normalmente dolorosi [220,221]. L’uso dell’ozono per il trattamento del dolore neuropatico è stato proposto per anni sulla base del suo potenziale antiossidante e antinfiammatorio; tuttavia il chiaro taglio molecolare alla base dell’effetto analgesico di questo gas su tali condizioni cliniche non è stato completamente chiarito.

È interessante notare che Fuccio et al. [222] ha mostrato che un’iniezione sottocutanea di ozono (90 o 180 µg / kg) riduceva l’allodinia meccanica e normalizzava i livelli genici di mRNA caspase-1, caspase-12 e caspase-8 in un modello animale del modello neuropatico.

È interessante notare che un’iniezione sottocutanea di ozono si traduce anche in significativi effetti farmacologici nella corteccia orbito-frontale, normalizzando l’espressione di caspasi pro-infiammatorie e riducendo la colorazione di IL-1β.

Tali risultati sono stati ampiamente confermati in ambito clinico e hanno fornito prove significative dell’efficacia e della sicurezza di questo trattamento in varie coorti di pazienti. In particolare, uno studio multicentrico randomizzato, in doppio cieco, simulato controllato con terapia in pazienti affetti da lombalgia acuta ha mostrato che le iniezioni paravertebrali lombari intramuscolari di una miscela di ossigeno-ozono erano sicure ed efficaci nell’alleviare il dolore e ridurre sia la disabilità che l’assunzione di farmaci analgesici.

Altri effetti benefici dell’ozono terapia sono stati associati a un significativo miglioramento delle funzioni cognitive e dello stato dell’umore.

In particolare, Coppola et al. [23] empiricamente hanno scoperto che i pazienti geriatrici con malattia occlusiva periferica e sottoposti a reinfusione di sangue autologo esposto all’ozono hanno mostrato miglioramenti significativi nei toni dell’umore in poche ore senza alcuna relazione con le condizioni cliniche generali.

Inoltre, gli autori hanno evidenziato che un tale miglioramento era anche accompagnato da un significativo aumento del fattore neurotrofico derivato dal cervello. Questi risultati sono stati ulteriormente confermati in un modello sperimentale di ictus che dimostra una significativa riduzione del danno neuronale e della formazione radicale [24]. Infine, l’insufflazione rettale dell’ozono ha mostrato un significativo effetto antinfiammatorio in un modello sperimentale di sclerosi multipla dimostrando un’efficacia farmacologica paragonabile al metil-prednisolone [25].

Terapia dell’ozono e malattie della pelle
A causa della sua sicurezza, l’ozono terapia è stata utilizzata per molti anni come metodo accessorio al trattamento di base, soprattutto nei casi in cui i metodi di trattamento tradizionali non danno risultati soddisfacenti, ad esempio la perdita di pelle in ferite non cicatrizzanti , ulcere, piaghe da decubito, fistole, ecc. [226.227].

La prima prova relativa agli effetti benefici dell’ozono nelle malattie della pelle fu fornita da Shpektorova [28] nel 1964. Coerentemente, Białoszewski et al. [229] hanno trattato pazienti con ozono con complicazioni settiche pesanti, croniche e resistenti agli antibiotici dopo traumi, procedure chirurgiche e infezioni cutanee secondarie, dimostrando che nelle ferite di tutti i pazienti con esperienza, l’inibizione dei processi settici e la guarigione delle ferite era molto più veloce di normale.

Un risultato secondario che dovrebbe essere tenuto in debito conto è che questo metodo riduce anche il costo della terapia antibiotica.
Al fine di chiarire completamente i meccanismi alla base degli effetti farmacologici dell’ozono sulla pelle, è necessario tenere in debito conto alcuni importanti aspetti anatomici e funzionali.

In particolare, l’ozono ha un basso potenziale di penetrazione nei tessuti cutanei poiché reagisce rapidamente con acidi grassi polinsaturi e acqua dello strato corneo portando alla formazione di ROS e lipooligopeptidi (LOP) che a loro volta vengono prontamente eliminati dagli antiossidanti della pelle e / o parzialmente assorbito attraverso i capillari venosi e linfatici (Figura 5).

La sicurezza della terapia con ozono non inalante è confermata anche da prove cliniche ottenute con volontari sani a seguito dell’esposizione a una miscela di ossigeno e ozono utilizzando una cabina chiusa che consente un’esposizione temporanea della pelle a concentrazioni di soli 0,9 µg mL-1 [230 ].

È interessante notare che gli autori hanno dimostrato che in tali condizioni cliniche, si è verificato un aumento significativo della pO2 e dei prodotti di perossidazione nel plasma venoso con una concomitante sensazione di benessere nei prossimi giorni.

Un approccio diverso per sfruttare l’effetto benefico dell’ozono nel superare l’instabilità dell’ozono nella preparazione farmaceutica è l’ozonide. Tali preparati sono di possibile interesse clinico poiché sono stabili per 2 anni a 4 ° C e possono essere utilizzati nel trattamento di varie infezioni delle aree cutanee e delle mucose.

L’olio ozonizzato è attualmente usato localmente per la riparazione di ferite, infezioni anaerobiche ed erpetiche, ulcere trofiche, ustioni, cellulite, ascessi, ragadi anali, fistole, gengivite e vulvovaginite [231].

Coerentemente con queste osservazioni, Matsumoto et al. ha dimostrato che l’olio ozonizzato è efficace in quasi tutti i pazienti arruolati nel trattamento di fistole e ferite chirurgiche croniche senza effetti collaterali [232].

Allo stesso modo, l’esposizione all’ozono ha ridotto significativamente la gravità delle lesioni da radiodermite nei pazienti con cancro [233].

Inoltre, Kim et al. [34] hanno suggerito che l’olio ozonizzato promuove l’accelerazione nelle riparazioni acute della ferita cutanea dall’aumentata espressione di PDGF, TGF-β1 e VEGF (Figura 5).




Figura 5. Una rappresentazione schematica dei possibili meccanismi di azione dell’ozono sulle malattie della pelle.

Infine, è stato riportato che l’esposizione all’ozono è associata all’attivazione del fattore di trascrizione NF-κB, svolgendo un ruolo fondamentale nella regolazione della risposta infiammatoria e nei meccanismi di guarigione della ferita [235–238].

Inoltre, precedenti rapporti hanno mostrato che livelli significativi di PDGF e TGF-β1 erano stati rilasciati dalle piastrine nel plasma eparinizzato di un paziente con ischemia degli arti dopo ozonizzazione (Figura 5) [231.239].

Coerentemente, uno studio precedente ha dimostrato che il perossido di idrogeno (H2O2) ha indotto potentemente l’espressione VEGF nei cheratinociti umani, che può stimolare la guarigione delle ferite [240].

Da questi studi precedenti, gli autori hanno ipotizzato che l’ozono potesse migliorare la guarigione acuta della ferita cutanea e questo potrebbe essere associato a fattori di crescita come FGF, PDGF, TGF-β e VEGF (Figura 5).

Allo stesso modo, Krkl et al. [241] hanno mostrato che l’olio d’oliva ozonizzato ha migliorato la neovascolarizzazione nei ratti quando è stato applicato localmente sui lembi cutanei tramite upregulation VEGF. Inoltre, l’olio di ozonizzazione ha ridotto la necrosi cutanea indotta dalla doxorubicina e le lesioni misurate da una significativa riduzione di TNF-α, SOD, GSH-Px e IL-1β [242] e dalla maggiore vitalità del lembo in un modello di ratto [243] .

Terapia dell’ozono e CVD

Le malattie cardiovascolari (CVD) sono un fattore importante nei tassi di mortalità in tutto il mondo [244]. La crescente evidenza ha evidenziato i ruoli dello stress ossidativo e dell’infiammazione nella promozione della CVD [245], portando a una compromissione della funzione endoteliale, un processo che promuove la lesione aterosclerotica o la formazione di strisce grasse (cellule di schiuma) associate a cardiopatia ischemica, ictus e maggiori eventi debilitanti [246.247]. In questo contesto, l’ozonoterapia può rappresentare un possibile approccio per correggere lo stress ossidativo e quindi migliorare la prognosi di molti pazienti [48,49].

L’ozono, agendo su obiettivi multipli, è indirettamente coinvolto nel recupero delle attività funzionali compromesse dalla malattia cronica. Sulla base dei meccanismi d’azione, la terapia con ozono induce una risposta biologica che include il miglioramento della circolazione sanguigna e il rilascio di ossigeno al tessuto ischemico a seguito dell’effetto concordato di NO e CO, un aumento del livello intraeritrocitario di 2,3-DPG ( Figura 6) [250.251], un aumento del glutatione ridotto, un miglioramento del metabolismo basale attraverso una migliore erogazione di ossigeno, una sovraregolazione degli enzimi antiossidanti cellulari, l’induzione di HO-1 e HSP-70 [252.253], l’induzione di una lieve attivazione del sistema immunitario e l’aumento del rilascio di fattori di crescita in assenza di effetti avversi acuti o in ritardo (Figura 6).

Pertanto, queste proprietà suggeriscono che le proprietà dell’ozono possono essere sfruttate nel trattamento della CVD. In effetti, diversi studi in vitro e in vivo, nonché alcuni studi clinici, hanno mostrato un effetto positivo nei disturbi cardiovascolari come la malattia coronarica (CAD), l’insufficienza cardiaca cronica (CHF), l’infarto del miocardio e le malattie dell’arteria periferica.

A questo proposito, uno studio clinico condotto da Martinez-Sanchez et al. ha dimostrato che la terapia integrativa con ozono ha portato a un trattamento benefico della coronaropatia e delle sue complicanze [54].

In particolare, questo studio ha dimostrato che l’effetto benefico dell’ozono terapia era correlato a una riduzione delle attività di SOD e catalasi, prodotti proteici di ossidazione avanzati, malondialdeide, potenziale di perossidazione e idroperossidi totali con un concomitante aumento dei livelli di GSH e la capacità di riduzione ferrica di plasma, con conseguente bassa produzione di O2 • e riduzione dello stress ossidativo.

Allo stesso modo, diversi studi hanno dimostrato che la terapia con ozono in pazienti con cardiopatia ischemica o che avevano subito un infarto miocardico acuto (AMI) ha prodotto effetti favorevoli in termini di dolore e prognosi.

Inoltre, in un caso clinico di un paziente di 76 anni affetto da un infarto del miocardio con parkinsonismo, ipertensione, malattia renale cronica e dislipidemia come comorbidità, gli autori hanno mostrato che grandi infusioni di sangue ozonizzato autologo per 18 mesi hanno portato a un miglioramento del miocardio contrattilità e protezione contro il rischio di recidive successive di AMI (Ozone Therapy 2017; volume 2: 6745).


Figura 6. Una rappresentazione schematica dei possibili meccanismi di azione dell’ozono nelle malattie della pelle.

Al fine di chiarire i possibili meccanismi farmacologici dell’ozono terapia, in uno studio precedente, gli autori hanno esposto i ratti a una miscela di ossigeno / ozono prima di una lesione acuta da ischemia / riperfusione del miocardio, dimostrando una significativa riduzione dell’area del miocardio infarto associata a un aumentato reclutamento di cellule progenitrici endoteliali (EPC) all’interno del miocardio [255] (Figura 6). Inoltre, in questo studio, l’effetto protettivo dell’ossigeno / ozono era strettamente correlato all’aumento dell’espressione e dell’attività cardiaca di eNOS.

Inoltre, Barone et al. ha dimostrato che l’ozonoterapia ha ridotto la ristenosi 30 giorni dopo l’angioplastica coronarica transluminale percutanea con impianti di stent metallici nei suini [256].

Gli autori hanno suggerito che l’autoemotrasfusione di ozono ha sovraregolato il sistema disintossicante e antiossidante innato (cioè le tioredossine), prevenendo l’iperplasia neointima post-stenting e una reazione infiammatoria, supportando così una successiva ri-endotelizzazione che può dipendere dall’aumento del tasso di glicolisi, dalla stimolazione della sintesi di NO e induzione di fattori di crescita [257.258].

Inoltre, diversi studi hanno dimostrato che nei pazienti con malattia arteriosa periferica occlusiva (PAD), la reinfusione di sangue autologo dopo l’ozonizzazione porta a correggere i parametri emostatico-emoreologici alterati migliorando il flusso sanguigno e il rilascio di O2 dall’emoglobina nei tessuti [259–261 ].

È stato anche dimostrato che l’autoemotrasfusione con sangue ozonizzato di per sé non influenza in modo significativo l’equilibrio fibrinolitico [262].

Tuttavia, la terapia con ozono è stata più efficace della prostaciclina nel trattamento delle lesioni cutanee nei pazienti con PAD, determinando anche un significativo miglioramento delle condizioni generali del paziente [263]. Inoltre, ulteriori studi hanno dimostrato che nei pazienti con malattia aterosclerotica occlusiva periferica (POAD), la terapia con ozono ha migliorato i sintomi della claudicatio intermittente [264,265].

Percorsi di applicazione non raccomandati nella terapia con ozono, una revisione critica

L’ozono utilizzato all’interno delle finestre terapeutiche determinate è assolutamente sicuro e più efficace dei farmaci standard dorati in numerose patologie.

Tuttavia, ci sono professionisti che, nell’interesse di aumentare la convenienza economica e aumentare la velocità nei trattamenti, fingono di curare le malattie croniche applicando modalità di somministrazione alternative, usando dosi elevate di ozono, che non sono standardizzate, né supportate da dati preclinici / clinici, né valutato tossicologicamente. 101

La Dichiarazione di Madrid sull’ozono terapia, 102 è un documento di consenso internazionale, non strumenti giuridicamente vincolanti. La Dichiarazione trae la sua autorità dal grado in cui è stata codificata o influenzata dalla legislazione e dai regolamenti nazionali o regionali. Questo documento sottolinea i seguenti stami:

“È assolutamente necessario lavorare con obiettivi specifici e in modo unificato per assicurare una pratica con grande precisione e sicurezza.

“Esiste una varianza che la comunità medica desidera standardizzare, e che sono già stati compiuti progressi, che dovrebbe essere preso in considerazione; è necessario continuare con lo sviluppo di definizioni mediche di procedure e protocolli che determinano le migliori applicazioni laddove necessario, nonché un codice di buone pratiche, al fine di superare più efficacemente la possibilità di pratiche illecite. “

Inoltre, questo documento è in linea con due principi generali della medicina:

  1. Primum non nocere : prima di ogni altra cosa, non fare alcun danno.
  2. I principi etici in medicina. 103 Questi principi generali dovrebbero essere presi in considerazione nella pratica clinica dell’ozono terapia. Di conseguenza, qualsiasi applicazione raccomandata di ozono dovrebbe essere documentata da studi preclinici e clinici.

Pertanto, lo scopo di questo manoscritto è quello di enfatizzare le regole per una pratica sicura dell’ozono terapia nella speranza che la terapia con ozono venga utilizzata in base a prove scientifiche per evitare danni irreversibili ai pazienti.

La ricerca ha incluso una revisione di articoli scientifici e documenti di risultati sperimentali nel database Ozone ISCO3 di MEDLINE e Zotero, tra gli anni 1980-2018. Descrittori: sono stati utilizzati ozono terapia, tossicologia, effetti collaterali.

Sono state individuate le principali fonti di informazione (articoli originali). Inoltre, sono stati consultati i documenti ufficiali di ISCO3 (in particolare ISCO3 / LEG / 00/10 Percorsi applicativi non consigliati). 104

I professionisti, escogita e protocollo, la chiave di una terapia medica sicura con ozono

professionista

Come definito dalla Dichiarazione di Madrid sull’ozono terapia 102 per eseguire qualsiasi procedura è richiesto personale tecnicamente qualificato. I professionisti dovrebbero frequentare corsi di formazione post-laurea che includano almeno i contenuti di base definiti da ISCO3, 105 o contenuti simili sotto la supervisione di un’università locale o un’associazione scientifica di ozono terapia.

I professionisti dovrebbero limitare la loro pratica al campo della loro formazione professionale di base. Ciò significa: i medici saranno responsabili delle cure mediche umane o delle sperimentazioni cliniche; i veterinari dovrebbero trattare malattie, disturbi e lesioni negli animali non umani; i dentisti dovrebbero trattare malattie e condizioni del cavo orale.

Biochimici, farmacisti, biologi parteciperanno alla ricerca molecolare, preclinica e clinica (in caso di ricerca clinica l’interazione diretta con i pazienti sarà responsabilità di un medico). Infermieri e tecnici agiranno seguendo le istruzioni del medico corrispondente.

Dispositivi / articoli monouso

I generatori utilizzati devono essere in linea con le raccomandazioni dell’ISCO3 6 e la miscela di gas ossigeno-ozono deve passare un filtro sterile antimicrobico (<20 µm) prima dell’iniezione. Tutti i materiali utilizzati devono essere monouso e resistenti all’ozono: vetro, sonde in silicone, cateteri e tubi in silicone, connessioni di Kynar o acciaio inossidabile 316 e siringhe siliconate. 2

protocolli

I protocolli clinici dovrebbero basarsi su prove (pre-cliniche / cliniche) che devono essere conformi ai principi scientifici / etici generalmente accettati; dipendeva da una conoscenza approfondita della letteratura scientifica e di altre fonti di informazione pertinenti, di laboratori adeguati e, se del caso, di sperimentazione animale.

Nuove vie di applicazione dell’ozono terapia implicano una ricerca clinica. La progettazione e l’esecuzione di ogni studio di ricerca su soggetti umani devono essere chiaramente descritte e giustificate in un protocollo di ricerca.

Qualsiasi ricerca clinica nel settore dell’ozono terapia deve soddisfare gli stessi criteri stabiliti per un farmaco regolare. Le nuove vie di applicazione proposte devono dimostrare alcuni vantaggi rispetto al trattamento disponibile, come ad esempio:

  • Mostrando efficacia superiore
  • Evitare gravi effetti collaterali di un trattamento disponibile
  • Migliorare la diagnosi di una malattia grave in cui la diagnosi precoce porta a un risultato migliore
  • Diminuendo una tossicità clinicamente significativa di un trattamento disponibile
  • Affrontare un previsto bisogno di salute pubblica

Meccanismo di base di farmacologia / tossicologia dell’ozono

Rapporto effetto dose

Le concentrazioni più elevate di ozono non sono necessariamente migliori, allo stesso modo in cui si verificano con tutti i medicinali. L’ozono terapia ha in generale due principali meccanismi di azione 1) Ossidazione diretta, con effetto immediato di O 3 (ad es. Inattivazione di microrganismi o mediatore del dolore) 2) Effetti surrogati, che comportano l’attivazione di effettori nucleari (Nrf2 o NFkB) per indurre un risposta farmacologica.

In entrambi, c’è una finestra terapeutica. La conoscenza delle finestre terapeutiche per ciascuna via di applicazione è descritta nella Dichiarazione di Madrid sull’ozono terapia 102 e rappresenta un riassunto estratto dall’esperienza clinica delle principali scuole di ozono terapia, derivata dalla pratica clinica o dalla ricerca sperimentale.

La risposta ormonale dell’ozono non è un’ipotesi, è un fatto dimostrato clinicamente e sperimentalmente. 107.108 L’interazione dei mediatori dell’ozono (principalmente H 2 O 2 e 4-idrossi-2,3- transnonenale (HNE) con il fattore nucleare induce una risposta terapeutica è ora ben stabilita dai dati scientifici. 109-111

Basse dosi di ozono sono in grado di utilizzare interruttori master redox molecolari noti come Nrf2 / Keap1 o NF-kB / IkB per effettuare la resistenza adattativa. In tal modo, basse dosi stimolano i percorsi protettivi delle cellule e la trascrizione nucleare senza alterare la vitalità cellulare; Al contrario, alte dosi possono essere genotossiche. 112-115

L’uso di dosi non appropriate di ozono in clinica può causare gravi effetti collaterali, dalla necrosi tissutale 116.117 a un potenziale cancro che può svilupparsi durante l’esposizione cronica o durante l’esposizione ad alte dosi. 118

Modalità di gestione dell’ozono

L’ozono può essere somministrato con grande flessibilità attraverso diverse vie (ad es. Ossigenazione-ozonizzazione del sangue extravascolare, sottocutanea, intramuscolare, intradiscale, intravaginale, intrauretrale, vescicale, ecc.); ma non dovrebbe mai essere usato :

.1. Per inalazione . L’ozono ossida gli antiossidanti disponibili e reagisce istantaneamente con gli acidi grassi polinsaturi del tensioattivo (PUFA) presenti nell’aria – interfaccia fluida del rivestimento epiteliale per formare specie reattive dell’ossigeno che danneggiano il sistema respiratorio. 119 Immediatamente dopo l’esposizione si sono manifestati i primi sintomi (mal di testa, tosse, gola secca, torace pesante, respiro corto) e dovrebbero essere prese misure di aiuto urgenti. 120

Esistono due eccezioni alla somministrazione di ozono o derivati ​​per inalazione.

  • Piccolo volume di ozono gassoso (O 2 / O 3 ) a bassa concentrazione (6 µg / mL), solo in apnea e condotto da un medico ben addestrato, per curare le malattie del seno. 121.122
  • Composti organici volatili generati dall’ozono. Esistono diversi metodi, come il gorgogliamento di oli essenziali (ad es. Olio essenziale di pino, timo, eucalipto, tea tree) o oli fissi (olio di girasole o olio di oliva), che generano derivati ​​che possono essere potenzialmente utilizzati dal punto terapeutico Visualizza. 123,124 In questo caso, il vapore inalato non è O 2 / O 3 , ma terpeni o altri composti organici

.2. Iniettato direttamente ( iniezione intra-arteriosa o iniezione endovenosa) come miscela di gas nei vasi circolatori a causa del rischio di provocare embolia dell’ossigeno, dato che la miscela di gas non contiene mai meno del 95% di ossigeno. 119

La sua applicazione è fortemente scoraggiata a causa del rischio di embolia gassosa che può verificarsi anche nel caso di utilizzo di una pompa per infusione lenta e volumi di 20 mL. Le complicanze dell’ictus vanno da una semplice sensazione di gorgoglio ascellare, quindi tosse, sensazione di peso retrosternale, vertigini, cambiamenti della visione (ambliopia), crisi ipotensiva, con segni di ischemia cerebrale (paresi dei membri) e morte.

È importante notare che almeno cinque pazienti sono deceduti a causa di un’embolia gassosa dopo somministrazione di ozono per iniezione endovenosa diretta. 125-128 Va tenuto presente che la solubilità dell’ossigeno a 37 ° C è solo di circa 0,23 ml per 100 ml di acqua plasmatica e, pertanto, il plasma venoso non può dissolvere l’ossigeno abbastanza rapidamente, portando alla formazione di un embolo gassoso. 102

Inoltre, l’ozono è un gas molto instabile, man mano che i minuti passano, la concentrazione si perde. Se inizia con 20 µg / mL, alla fine dei 5 min, la concentrazione finirà in (10-14) µg / mL o anche meno.

Tenendo conto delle attuali conoscenze scientifiche, l’uso del DIV (applicazione endovenosa diretta) comporta un rischio non necessario, che non dovrebbe essere effettuato al di fuori di una sperimentazione clinica, né in un centro senza capacità di risolvere potenziali complicanze.

D’altro canto, le società scientifiche dovrebbero chiarire ufficialmente la propria posizione nei suoi confronti (al di fuori dei suoi studi registrati), per salvaguardare l’immagine dell’ozono terapia in caso di incidenti.

Basterebbe che solo un risultato iatrogeno prodotto per l’utilizzo del DIV provocherebbe un caos nella comunità professionale dell’ozono terapia. Pertanto, è della massima importanza evitare nella pratica quotidiana interventi medici che mettano a rischio la vita del paziente, soprattutto se la procedura non è stata scientificamente dimostrata. Qualsiasi cattivo risultato sarebbe dannoso per l’ozono terapia.

Un documento tedesco descrive un metodo che usa la somministrazione di O 2 per iv. Secondo questo metodo usano un flusso da 1 ml / min a circa 3 ml / min nella vena. La dose iniziale è (10-20) ml e aumenta nelle successive 3 settimane di 10 ml ogni settimana.

Secondo gli autori, a parte il generale miglioramento della disponibilità di ossigeno, l’ossigenoterapia endovenosa causa eosinofilia, che può essere valutata come un aumento della resistenza immunologica cellulare indeterminata.

Inoltre, le qualità reologiche del sangue e la diuresi sono migliorate, il rilascio di ossigeno nel tessuto è aumentato e il pH del sangue è normalizzato. Inoltre, l’autore suggerisce che rispetto all’ossigenoterapia iperbarica, l’ossigenoterapia endovenosa sembra avere meno effetti collaterali.

L’applicazione è meno complicata, meno costosa ma probabilmente di maggiore efficacia. 129 Tuttavia, il risultato è stato limitato all’analisi di 20 pazienti e non può essere riprodotto da nessun altro studio clinico. Poiché il potenziale rischio di evento embolico, il potenziale beneficio di questo metodo deve essere verificato negli studi preclinici.

Questo studio è stato condotto solo con O 2 o O 3 , promotore di IV O 3 che utilizza questo documento per estrapolare i risultati e confondere le persone. È noto che gli effetti biologici di O 2 o O 3 sono completamente diversi.

Terapie emergenti nella terapia con ozono

Con il termine “terapie emergenti” nella terapia con ozono, si può riassumere una serie di metodi non supportati da prove scientifiche che non tengono conto di nessuno dei problemi riguardanti la pratica sicura della terapia con ozono.

Nemmeno un “caso clinico” può essere trovato né dati preclinici a supporto di quelle varianti aberranti. Gli unici canali per la diffusione del “successo” della terapia sono Facebook, YouTube, siti web personali, testimonianze di pazienti, ecc.

Pertanto, nella maggior parte dei casi, costituiscono casi gravi di sperimentazione umana che saltano gli standard etici medici elementari. 103 Nella maggior parte dei casi, i metodi sono pubblicizzati come malattie “curative” o “risolutive” croniche o terminali (ad es. Cancro o HIV). Tuttavia, l’elenco delle malattie che “curano” questi metodi è infinito.

Al contrario di apparire come metodi più efficaci di quelli tradizionali, ci sono segnalazioni di decessi e gravi eventi avversi tra i pazienti che sono stati trattati con terapie emergenti. Esiste un rapporto permanente sui social media sugli effetti collaterali gravi dopo tali pratiche (ad esempio nella Tabella 1 e nella Figura 1).

Le più rappresentative delle terapie emergenti sono: applicazione endovenosa diretta (DIV), metodo di Robins per l’ozono terapia endovenosa diretta℠ (RMDIV ℠), metodo iperbarico (HBO3) a più passaggi, (3-10 o più passaggi) con 200 mL sangue + 200 mL O 3 a 70 µg / mL a 1 bar di pressione e (2000-25000) UI di eparina per passaggio, terapia con ozono ad alta dose (HDO) e ozono intraperitoneale (IPO3).

Applicazione endovenosa diretta (DIV)

DIV non ha prove scientifiche. Una simulazione dell’effetto del DIV in uno studio preclinico usando modelli di topo e coniglio, arriva a questa conclusione: “I risultati preclinici ottenuti dimostrano che l’implementazione dell’ozono endovenoso diretto è altamente rischiosa, a causa dei gravi effetti avversi e della mortalità che può piombo, quindi il suo uso non è giustificato nell’uomo 130

A causa della mancanza di omogeneità nella terminologia utilizzata nella terapia con ozono, una ricerca bibliografica usando la parola chiave “ozono endovenoso” può portare alla comparsa di 15 articoli. 131-145

Tuttavia, la lettura della sezione “materiali e metodi”, evidenzia che gli autori hanno chiamato “ozono endovenoso” per la classica autoemoterapia maggiore (MAHT) o per la somministrazione di soluzione salina ozonizzata (O3SS).

In ogni caso non usano il gas ozono direttamente nella vena. In clinica, l’unico rapporto afferma che il beneficio dell’uso di DIV è apparso nel 2016 146 , questo articolo riporta l’uso di DIV e ozono in altri modi in 3 pazienti affetti da Ebola Virus Disease (EVD) durante l’epidemia in Sierra Leona.

I sintomi di embolia gassosa sono evidenti nei pazienti sottoposti a DIV. Nonostante la discussione teorica, se l’ossigeno (il componente principale di O 2 / O 3 ) possa essere o meno gas embolico, il fatto è che ci sono segnalazioni di decessi mediante l’applicazione di questo metodo. 125-127

Metodo multibar iperbarico (HBO3)

Il metodo iperbarico a più passaggi utilizza dosi extra di ozono e dosi extra di eparina. Come DIV, HBO3 non ha alcuna evidenza clinica preclinica o scientifica. Secondo le prove aneddotiche dei pazienti (Tabella 1) o dei professionisti, i principali effetti collaterali sono: perdita della vista, disturbi polmonari, urine colorate (rosso, marrone).

È noto che l’associazione di eparina con l’ozono aumenta le attivazioni delle piastrine. 147,148 Questo è il motivo per cui il MAHT utilizza un anticoagulante a base di citrato. In 10 passaggi tipici (200 mL di sangue + 200 mL di O 3 a 70 µg / mL + 2000 U di eparina) il paziente riceve una dose totale di 140 mg di ozono (in MAHT 100 mL di O 3 a 40 µg / mL, i pazienti ricevono 4 mg) e 20.000 U di eparina.

La dose di eparina è troppo elevata per un paziente senza disturbo della coagulazione e può esacerbare il principale effetto collaterale dell’eparina: trombocitopenia, lieve dolore, ematoma, emorragia, irritazione locale, eritema, aumento dell’aminotransferasi epatica, anafilassi e reazione di ipersensibilità. 149 Gli effetti indesiderati osservati durante il multi pass de HBO3 sono indicativi della tossicità dell’ozono alto.

Ozono intraperitoneale (ip)

Si dice che in caso di mesotelioma, carcinomatosi peritoneale o peritonite, si possano eseguire iniezioni endoperitoneali o endopleurali fino a 2,5 L di miscela gassosa con una concentrazione di ozono di 10-20 μg / mL. 104 Questa modalità viene utilizzata raramente e deve essere eseguita da uno specialista. 101

Non ci sono studi clinici documentati sui suoi benefici. Tuttavia, l’uso di questa terapia nel cancro è supportato da uno studio preclinico. 150-152 La somministrazione del farmaco nello studio preclinico per via intraperitoneale (ip) è normale, poiché l’approccio difficile alle vene dell’animale.

Ip è principalmente considerato un modo sperimentale. Il modello sperimentale di cancro nei conigli viene eseguito mediante l’impianto del tumore nell’orecchio di coniglio, pertanto la vena dell’orecchio marginale non può essere utilizzata per la somministrazione di farmaci.

Significa che il risultato osservato nella sperimentazione preclinica probabilmente non dipende dal modo di somministrazione.

L’uso dell’ip nell’uomo non è frequente e, poiché comporta un metodo molto invasivo, richiede una condizione di quirofano. Pertanto, i benefici dell’ozono come adiuvante nel cancro dovrebbero essere raggiunti in altri modi come il MAHT, 153 con bassi effetti collaterali, basso costo e bassa invasività rispetto all’ip (emorragia intraperitoneale, dolore, ecc.).

Qualsiasi intervento sul cancro deve essere approvato dal paziente e consultato con un oncologo. L’unico fatto oggi disponibile sul ruolo dell’ozono nel cancro, è ruolo di adiuvante, 154 non come una cura. Promettere o creare aspettative di guarigione di un paziente con cancro è una grave mancanza di etica medica.

Analisi comparativa di vari metodi

Una tabella comparativa mostra le differenze tra metodi consolidati di applicazione dell’ozono e “i metodi emergenti” (Tabella 1). Come dimostrato dall’evidenza, vi sono importanti differenze tra il numero di prove scientifiche tra i metodi regolari di applicazione dell’ozono e i “metodi emergenti”.

Tabella 1. Confronto basato su prove di alcuni metodi regolari ed “emergenti” di applicazioni dell’ozono terapia.

Legenda: MAHT, autoemoterapia maggiore; RIO3, insufflazione rettale; O3SS, soluzione salina ozonizzata; DIV, applicazione venosa diretta; HBO3, passaggi multipli iperbarici; IPO3, ozono intraperitoneale.
* Gli effetti collaterali MAHT descritti sono gusto molto discreto del metallo all’inizio della reinfusione, stanchezza il giorno successivo, necessità di regolare i farmaci antidiabetici per abbassare le dosi, necessità di regolare i farmaci anti-ipertiroidismo per abbassare le dosi, necessità di regolare i farmaci per il cuore Digitalis per ridurre le dosi, è necessario regolare i farmaci antipertensivi.55 Gli effetti collaterali descritti nella Tabella 1 per MAHT sono stati la conseguenza della prassi di malessere.
** Quando l’ozono è stato somministrato per insufflazione rettale, sono stati segnalati casi di gonfiore e costipazione. insufflation.56
*** Il numero di trattamenti e pazienti è stato segnalato da Howard F. Robins, DPM in una lettera all’ISCO3 del 2014, intitolata: La sicurezza e i vantaggi della terapia con ozono endovenoso diretto (DIV). Ma non supportato da alcuna bibliografia o studio clinico rilevante.

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